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黄瓜花叶病毒可视化RT-LAMP试剂盒图片
产品货号:
BTN12-2030
中文名称:
黄瓜花叶病毒可视化RT-LAMP试剂盒
英文名称:
Cucumber Mosaic Virus Colorimetric RT-LAMP Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是基于可视化RT-LMAP技术开发的简单快捷的黄瓜花叶病毒检测试剂盒。




黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus,CMV)属于雀麦花叶病毒科、黄瓜花叶病毒属的一个典型成员,为正义单链RNA病毒。黄瓜花叶病毒的寄主范围相当广泛,能侵染85科365属1000多种植物,其中包括许多经济上很重要的作物如番茄、黄瓜、烟草、辣椒、白菜、西瓜和果树等。CMV侵染植物产生的症状随寄主的改变而改变,常见的症状有花叶、皱缩、黄化和植株矮化,还有系统坏死等,幼期植物被侵染往往表现出更严重的症状,给农业生产造成巨大损失。因此,快速检测黄瓜花叶病毒具有重要的意义。




  1. 即开即用,用户只需要提供RNA样品。
  2. 恒温扩增,可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
  3. 检测灵敏度一般比RT-PCR高10倍以上。
  4. 特异性高,根据黄瓜花叶病毒保守序列设计6条特异引物,不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
  5. 一般30分钟内出结果,比PCR快。
  6. 上样量大,对20μL的反应体系,最大样品加样量高达到14μL。
  7. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
  8. 本制品只能用于定性分析,不推荐用于定量分析。
  9. 本制品足够50次20μL体系的可视化RT-LAMP扩增。
  10. 本制品只可用于科研。



组分规格
4×Visual RT-LAMP MasterMix200μL
逆转录酶-扩增酶混合液50μL
20×黄瓜花叶病毒LAMP引物干粉50次
黄瓜花叶病毒阳性对照(104拷贝/μL)250μL
超纯水1mL

保存:-20℃,有效期一年。


引物干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入200μL超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。


一、样品RNA的制备
  1. 用自选方法纯化样品RNA,本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容,包括本公司的免提取的核酸释放剂。
  2. 如果有N个样品,则需要做N+2个样品制备,包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(104拷贝/μL)加一定量的水作为样品制备PC,加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。


二、RT-LAMP反应(20μL体系)
  1. 反应设置:第一次使用时请把50μL逆转录酶-扩增酶混合液加入到4×Visual RT-LAMP MasterMix中,轻柔颠倒20次充分混匀,然后再取用。如果有N+2个RNA纯化样品,则最好设置N+4个RT-LAMP扩增,增加RT-LAMP扩增阳性对照和RT-LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
    成分N+2个
    样品管
    RT-LAMP
    阴性对照
    RT-LAMP
    阳性对照
    4×Visual RT-LAMP MasterMix(已加酶)各5μL5μL5μL
    20×黄瓜花叶病毒LAMP引物混合液各1μL1μL1μL
    N+2个样品RNA各14μL不加不加
    超纯水不加14μL不加
    黄瓜花叶病毒阳性对照(104拷贝/μL)不加不加14μL
  2. 使用常规PCR仪进行LAMP反应,设置程序时必须打开热盖,设置成65℃保温60分钟进行扩增。


三、结果分析
  1. 电泳分析:由于取样时非常容易产生气溶胶污染,污染实验环境并且非常难清除污染,所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用,也要在不同的房间,使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物),RT-LAMP阴性结果必须无条带,否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常,再分析待测样品。典型的电泳结果见下表,奇数样为阴性结果,偶数样为阳性结果:
    黄瓜花叶病毒RT-LAMP试剂盒(可视化染料)
  2. 可将光(肉眼)分析:样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色,样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色,否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常,则实验有效,可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性,如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图(9为阴性,10为阳性)。
    黄瓜花叶病毒RT-LAMP试剂盒(可视化染料)




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